Skip to content

Mutacja STIM1 związana z zespołem niedoborów odporności i autoimmunizacji ad 6

4 tygodnie ago

522 words

Panel D pokazuje średnią (od trzech do pięciu eksperymentów) szczytowy poziom Ca2 + i początkową szybkość napływu Ca2 + w fibroblastach z V-1 pacjenta zawierającego puste wektory lub wektory wyrażające ORAI1, STIM1 lub STIM2. Przedstawione dane zmierzono po dodaniu 20 mM Ca2 + w 500 sekund. W panelu D słupki I wskazują błąd standardowy. Ponieważ kodony przedwczesnej terminacji często powodują zanik mediowany nonsensem informacyjnego RNA (mRNA), 24 przeanalizowaliśmy poziomy transkryptu mRNA i poziomu białka dla STIM1 u pacjenta V-1. Znaleźliśmy znacząco obniżone poziomy mRNA STIM1 w fibroblastach od Pacjenta V-1 w porównaniu z kontrolnymi fibroblastami (P = 0,04), jak zmierzono metodą PCR z odwrotną transkryptazą w czasie rzeczywistym (Figura 2A). Stwierdzono natomiast, że poziomy transkrypcji dla STIM2 były podobne w fibroblastach z Pacjenta V-1 i jednej kontrolnej linii komórkowej. Ekspresja białka STIM1 pełnej długości nie była wykrywalna w fibroblastach od Pacjenta V-1, w porównaniu z komórkami od kontroli i wcześniej opisanego pacjenta z niedoborem ORAI1 8 (Figura 2B). Przeciwciało skierowane przeciwko N-końcowemu STIM1 również nie wykryło pełnej długości STIM1 lub przewidywanego zmutowanego fragmentu STIM1 (o wielkości około 15 kD) w komórkach od Pacjenta V-1 (ryc. 3 w dodatkowym dodatku). Podsumowując, dane te wskazują, że w komórkach naszego pacjenta brakuje lub znacząco zredukowano mRNA i białko STIM1.
Aby potwierdzić przyczynową rolę nonsensownej mutacji STIM1 w wadliwym wejściu Ca2 + sterowanym przez magazyn, transdukowaliśmy fibroblasty od Pacjenta V-1 STIM1 typu dzikiego, STIM2, ORAI1 lub pustego wektora przy użyciu retrowirusowych wektorów ekspresyjnych, które pozwalają na bicistronową ekspresję GFP z wewnętrznego miejsca wejścia rybosomu. Do analizy napływu Ca2 + wybrano komórki znakowane GFP. Transdukcji z ORAI1 nie udało się uratować defektu w fibroblastach pacjenta, ale ekspresja STIM1 uratowała napływ Ca2 + z magazynu. Podobny, choć mniej zdecydowany, proces ratowania wejścia Ca2 + z magazynem obserwowano po transdukcji fibroblastów pacjenta za pomocą STIM2 typu dzikiego (rysunek 2C i 2D). Podobny efekt STIM2 stwierdzono w fibroblastach pozbawionych Stim1 zebranych z zarodków myszy.21 Niemniej jednak ilość endogennego STIM2 w komórkach od Pacjenta V-1 wydaje się niewystarczająca, aby zrekompensować brak STIM1.
Dyskusja
Jedna z najsilniejszych wskazań, że dopływ Ca2 + przez kanały CRAC jest niezbędna do aktywacji limfocytów, a odpowiedzi immunologiczne pochodzą z badań rzadkich dziedzicznych zespołów niedoboru odporności obejmujących defekty w sterowanej opróżnieniem pozycji Ca2 +. 8.14,25-27 Opisujemy trzy rodzeństwo z złożone zaburzenie niedoboru odporności, a szczegółowe badania jednego z nich wykazały zmniejszenie lub brak obecności STIM1 w wyniku mutacji nonsensownej w STIM1. To, czy Pacjent V-4 ma taką samą mutację w STIM1, jest jeszcze nieznane, ale jest prawdopodobne, ponieważ obraz kliniczny dla wszystkich trzech dzieci był praktycznie taki sam.
STIM1 jest wymagany do aktywacji wejścia Ca2 + sterowanego przez magazyn w różnych komórkach, w tym limfocytach. 6,7,20-23 Stwierdziliśmy, że fibroblasty od pacjenta z niedoborem STIM1 mają poważną wadę wejścia Ca2 +, która została uratowana przez ponowne wprowadzenie dzikich zwierząt. wpisz STIM1 w komórkach pacjenta
[podobne: otwieranie drzwi, firma sprzątająca Poznań, firma sprzątająca ]

Powiązane tematy z artykułem: firma sprzątająca firma sprzątająca Poznań otwieranie drzwi