Skip to content

Mutacja STIM1 związana z zespołem niedoborów odporności i autoimmunizacji ad 5

2 miesiące ago

496 words

Ta mutacja powoduje przesunięcie ramki, które zmienia osiem aminokwasów (RSIQLDRG) i powoduje przedwczesny kodon terminacji w STIM1. Ta sama mutacja została stwierdzona u Pacjenta V-7. Mutacja 380_381insA nie jest znanym SNP (zgodnie z dbSNP, build 129) i nie została znaleziona w 50 niespokrewnionych kontrolach (dane nie pokazane). Oczekuje się, że przewidywane zmutowane białko, oznaczane jako STIM1-E136X, zostanie obcięte na początku sterylnej domeny motywu alfa (SAM) w części retikulum-światło lędźwiowej STIM1 (Figura 1D). Utrata STIM1
Rycina 2. Rycina 2. Brak funkcjonalnej interakcji zrębu – cząsteczka (STIM1) w fibroblastach i przywrócenie dopływu jonów Ca2 + z dodatkiem egzogennych STIM1 i STIM2. Panel A pokazuje poziomy informacyjnego RNA STIM1 (mRNA) w fibroblastach od kontroli i Pacjenta V-1. Ilościową PCR w czasie rzeczywistym przeprowadzono na komplementarnym DNA (cDNA) z fibroblastów Pacjenta V-1 i kontrolnych linii komórkowych fibroblastów (siedem linii dla eksperymentów STIM1 i jednej linii dla eksperymentów STIM2), amplifikowanych za pomocą starterów specyficznych dla STIM1 STIM2 i gen kodujący dehydrogenazę gliceraldehydo-3-fosforanową (GAPDH). Cykle progowe (CT) dla ekspresji STIM1 i STIM2, znormalizowane do tych z GAPDH (.CT), wykreślono jako 0,5.CT x 104 (jednostki arbitralne). Eksperymenty przeprowadzono trzykrotnie; przedstawiono wyniki jednego reprezentatywnego eksperymentu. Paski I wskazują błąd standardowy. Panel B pokazuje ekspresję białka STIM1, jak wykryto w analizie Western, w fibroblastach od Pacjenta V-1, kontroli i wcześniej opisanego pacjenta z niedoborem ORAI1 (z powodu mutacji R91W), 8 jak również komórek T Jurkat, które były wiadomo, że ekspresjonuje STIM1 (pochodzący od pacjenta z ostrą białaczką limfoblastyczną z komórek T). Całkowite lizaty komórek rozdzielono za pomocą elektroforezy w żelu sodowym z dodecylosiarczanem-poliakrylamidem i inkubowano z oczyszczonym przez powinowactwo przeciwciałem przeciwko C-końcowej domenie STIM1. Ekspresja aktyny (zmierzona po inkubacji wydzielonych lizatów komórek z przeciwciałem anty-aktynowym) jest pokazana jako kontrola wskazująca równe obciążenie. W panelu C (u góry) wykazano, że wejście Ca2 + z magazynem w fibroblastach od pacjenta V-1 jest przywracane po transdukcji bicistronowymi wektorami retrowirusowymi wyrażającymi pełnej długości STIM1 lub STIM2 (po prawej), ale nie po transdukcji z pustym wektorem (nie insert) lub wektor wyrażający ORAI1 (po lewej). Wszystkie wektory zawierały kasetę z wewnętrznym zielonym fluorescencyjnym białkiem (GFP) do wprowadzania rybosomów do wykrywania transdukowanych komórek. Otrzymano pomiary Ca2 + i przedstawiono je, jak opisano na Figurze 1B. Analizowano od 20 do 40 komórek na eksperyment. Panel C (na dole) pokazuje reprezentatywne wyniki dla fibroblastów od pacjenta V-1 transdukowanego wektorami STIM1 lub STIM2 promującymi bicistronową ekspresję GFP. Obrazy Fura-2 pokazują pseudokolorowe wewnątrzkomórkowe poziomy Ca2 +: niebieski oznacza niski Ca2 +, zielony pośredni Ca2 + i żółty-czerwony wysoki Ca2 +. Obrazy GFP przedstawiają komórki wyrażające GFP z wewnętrznego miejsca wejścia rybosomu, co wskazuje na równoczesną ekspresję STIM1 lub STIM2. W przeciwieństwie do nietransdukowanych komórek (niewidocznych w obrazach GFP), komórki transdukowane (zielone) wykazują wysokie wewnątrzkomórkowe poziomy Ca2 +
[patrz też: skierowanie do sanatorium nfz kolejka, ginekolog na nfz lublin, internista wikipedia ]

Powiązane tematy z artykułem: ginekolog na nfz lublin internista wikipedia skierowanie do sanatorium nfz kolejka